Versuchsprotokoll: Messung der Responsivität von TLR9 auf extrazelluläre Stimuli mittels Luziferase-Reportergen-Assay


Praktikumsbericht / -arbeit, 2011

4 Seiten, Note: 1


Inhaltsangabe oder Einleitung

Die Zellen des Immunsystems besitzen unterschiedliche Strategien zur Reaktion auf
extrazelluläre Stimuli (z.B. Pathogene). Beginnend bei der Bindung des Antigens durch einen
spezifischen Rezeptor wird eine intrazelluläre Signalkaskade in Gang gesetzt, die zumeist in
einer Aktivierung von Trankskriptionsfaktoren (TF) resultiert. Diese TF vermitteln schließlich
im Nukleus die transkriptionelle Aktivierung von Zielgenen. Eine Rezeptorfamilie mit
wichtiger Funktion bei der Immunantwort auf verschiedene Pathogene sind die sog. „tolllike“
Rezeptoren (TLR), deren Stimulation über die Aktivierung von Signaltransduktoren, z.B.
des nukleären TF κB (NF-κB) im Falle des TLR9, die Bildung von proinflammatorischen
Zytokinen befördert.
Das Ziel dieses Versuchs war die Untersuchung der Stärke der Aktivierung von NF-κB als
Reaktion des TLR9 auf unterschiedliche Antigene, um dadurch Aussagen über die
natürlichen, spezifischen Liganden des Rezeptors treffen zu können.
In dem durchgeführten Versuch wurden TLR9-exprimierende HEK293-Zellen („human
embryonic kidney cells“) verwendet und mit Plasmiden transfiziert, die für das Enzym
Luziferase kodierende Gene enthielten, deren Promotoren eine NF-κB-spezifische
Erkennungssequenz aufwiesen. Die Auslösung der TLR9-Signalkaskade durch ein passendes
Antigen sollte sich daher in der Bildung von aktivem NF-κB niederschlagen und in der Folge
die Transkriptionsaktivität des Reporterenzyms Luziferase erhöhen. Durch die Zugabe von
Luziferin, das bei der Umsetzung durch die Luziferase bioluminesziert, war es aufgrund der
Korrelation der Stärke eines TLR9-Stimulus mit dem bei der Reaktion emittierten Licht
möglich, die immunologische Reaktion von TLR9-exprimierenden Zellen auf diverse Antigene
zu untersuchen.
Mit dieser Technik wurden die bakteriellen Antigene Lipopolysaccharid (LPS) und Pam3Cys,
PolyIC, ein Analogon viraler dsRNA, sowie die Oligodesoxynukleotide (ODN) 1668 (mit
normalem CpG-Motiv) und 1720 (mit invertiertem CpG-Motiv) auf ihre Interaktion mit dem
TLR9 getestet.

Details

Titel
Versuchsprotokoll: Messung der Responsivität von TLR9 auf extrazelluläre Stimuli mittels Luziferase-Reportergen-Assay
Hochschule
Philipps-Universität Marburg
Note
1
Autor
Jahr
2011
Seiten
4
Katalognummer
V182193
ISBN (eBook)
9783656057130
Dateigröße
485 KB
Sprache
Deutsch
Schlagworte
tlr, toll like, luziferase, luziferin, hek293, responsivität, angeborene immunität, angeborenes immunsystem, NF-kB, CpG DNA
Arbeit zitieren
Sandro Halwe (Autor:in), 2011, Versuchsprotokoll: Messung der Responsivität von TLR9 auf extrazelluläre Stimuli mittels Luziferase-Reportergen-Assay, München, GRIN Verlag, https://www.grin.com/document/182193

Kommentare

  • Noch keine Kommentare.
Blick ins Buch
Titel: Versuchsprotokoll: Messung der Responsivität von TLR9 auf extrazelluläre Stimuli mittels Luziferase-Reportergen-Assay



Ihre Arbeit hochladen

Ihre Hausarbeit / Abschlussarbeit:

- Publikation als eBook und Buch
- Hohes Honorar auf die Verkäufe
- Für Sie komplett kostenlos – mit ISBN
- Es dauert nur 5 Minuten
- Jede Arbeit findet Leser

Kostenlos Autor werden