Richtige Konstruktion der Primer sonst keine Synthese oder falsche

Außerdem Primer ca. 17 Basen lang weil sonst mehrere komplimentäre Stellen auf DNS

II. Reaktionstemperatur

Denauterierung: 94 ⁰ C

Hybridvisierungstemperatur vom Primer abhängig, berechnen DNS- Synthese 74 ⁰ C

1. Agarosegelelektrophese:

a. Produkt + Agarosegel + Ethidiumbromid = ein Band sichtbar Sonst Wiederholung des Experiments b. Feststellung der Länge ( Deletion/ Insertion ??)

2. Sequenzanalyse der gewonnen DNS ( Folie): Aufspaltung der DNS

Normaler und modifizierter ( Magnetkügelchen) Primer Denauterierung und Trennung der Stränge Mit Enzym Sequenzase Molekül erkennen der Aminosequenz Anwendungsgebiete:

1. DNS Analyse

Extreme Empfindlichkeit der PCR ( ein einziges DNS Molekül kann Matrize sein)

Gerichtsmedizin: - Untersuchung von Haare und Blutflecken

2. Klinische Diagnose ( Folie): Schnellen Analyse fraglicher Mutationen durch PCR Gegensatz Früher

3. Vervielfältigung von RNA

RNA + Enzym + Reverse Transkriptase = einzelsträngiger cDNS- Strang Dann Zugabe der Primer und der Polymerase = PCR

Durch sog. RT-PCR messen des Mengenverhältnisse in verschieden Geweben zu verschiedenen Zeitpunkten Je höher mRNA Konzentration desto höhere Genaktivität Wegen hohen Empfindlichkeit der PCR Messung weniger aktiver Gene möglich

4. Vergleichen verschiedener Genome ( Folie)

Zufallsexperimente kurze Primer Stücke die an mehreren DNS Stücken anheften kann man die Gesamtstruktur erkennen, so dass man aus dem Bandenmuster etwas über die Organisation des Genomos erfährt. Evolutionsgeschichte: Festellen der Verwandtschaft zwischen den Lebewesen ( RAPD ) Beispiel:

Fruchtkörper eines Hallimaschpilzes besaß immer die genau gleiche Genomstruktur ein riesiger Klon der sich über 1000000 m ² erstreckt und eines der ältesten Lebewesen dieser Erde ist.