La leucemia linfatica cronica (CLL) è la forma di leucemia più frequente nei paesi occidentali ed è considerata incurabile. In questa patologia si ha un accumulo di linfociti B CD5+ nel sangue periferico e negli organi linfoidi dove le cellule tumorali trovano un microambiente che favorisce la loro sopravvivenza e proliferazione. Le cellule B leucemiche modificano a loro volta il comportamento delle cellule della nicchia stromale, aumentando la loro capacità di supportare la sopravvivenza delle cellule neoplastiche e sopprimendo la risposta immunitaria antitumorale.
Fattori chiave implicati nell’homing e nella stasi a livello di queste nicchie sono le chemiochine prodotte dalle cellule stromali locali e i relativi recettori espressi ad alti livelli dalle cellule B tumorali. È nota una forte correlazione tra la ridotta espressione della proteina pro-apoptotica p66Shc e l’aggressività della malattia, in parte dovuta ad alterazioni nell’espressione dei recettori chemiochinici delle cellule tumorali. Infatti, topi EµTCL1/p66Shc-/- sviluppano una leucemia molto più aggressiva rispetto a topi EµTCL1, modello murino della malattia. Poco si sa invece riguardo l’effetto della ridotta espressione di p66Shc nelle cellule tumorali sul fenotipo delle cellule stromali ed in particolare sull’espressione delle chemiochine. In questo lavoro è stata valutata, attraverso la PCR real-time quantitativa, l’espressione delle chemiochine CXCL9, CXCL10, CXCL11, CCL2, CCL19 e CXCL13 in cellule stromali murine OP9 coltivate in terreni di coltura condizionati da cellule B tumorali purificate da topi EµTCL1, EµTCL1/p66Shc-/- e wild-type, e in cellule OP9 co-coltivate in presenza delle cellule B tumorali stesse.
I risultati mostrano una significativa proporzionalità inversa tra l’espressione di p66Shc della cellula B neoplastica e l’espressione di queste chemiochine da parte delle cellule OP9, in particolare negli esperimenti di co-coltura. Tali chemiochine potrebbero rappresentare fattori di richiamo delle cellule B tumorali nella fase di promozione/progressione della CLL, e la ridotta espressione di p66Shc potrebbe favorire la progressione della malattia anche attraverso la modificazione del microambiente attuata dalla cellula tumorale.
Inhaltsverzeichnis
- 1. INTRODUZIONE
- 1.1 La leucemia linfatica cronica
- 1.2 Il microambiente stromale
- 1.3 La proteina p66Shc
- 1.4 Topo EμTCL1, modello di CLL
- 1.5 Topo EμTCL1/p66Shc/-
- 2. SCOPO DELLA TESI
- 3. MATERIALI E METODI
- 3.1 Modelli murini e linee cellulari
- 3.2 Preparazione di sovranatante da cellule murine
- 3.3 Trattamento delle cellule OP9
- 3.4 Estrazione dell'RNA, quantificazione e retrotrascrizione
- 3.5 PCR real-time quantitativa
- 3.6 Analisi statistica dei dati sperimentali
- 4. RISULTATI E DISCUSSIONE
- 5. CONCLUSIONI
Zielsetzung und Themenschwerpunkte
Diese Arbeit zielt darauf ab, die Auswirkungen der reduzierten Expression des pro-apoptotischen Proteins p66Shc in B-CLL-Zellen auf das Chemokin-Profil von stromalen Zellen zu untersuchen. Es wird die Hypothese aufgestellt, dass eine gestörte Expression von p66Shc in leukämischen B-Zellen das Mikromilieu beeinflusst und die Progression der chronisch lymphatischen Leukämie (CLL) fördert.
- Die Rolle des Mikromilieus in der CLL-Progression
- Der Einfluss von p66Shc auf die Chemokin-Expression
- Die Interaktion zwischen leukämischen B-Zellen und stromalen Zellen
- Der Einfluss von Chemokinen auf die Rekrutierung von leukämischen B-Zellen
- Mögliche Mechanismen, die zur Progression der CLL beitragen
Zusammenfassung der Kapitel
Das erste Kapitel bietet einen Überblick über die chronisch lymphatische Leukämie (CLL), ihre klinischen Merkmale und die Rolle des Mikromilieus in der Progression der Krankheit. Es werden die verschiedenen Zelltypen des Mikromilieus vorgestellt, einschließlich der stromalen Zellen, und ihre Interaktion mit leukämischen B-Zellen wird diskutiert. Darüber hinaus wird die Bedeutung des Proteins p66Shc für die Apoptose und die Proliferation von B-Zellen erläutert. Die Studie verwendet ein Mausmodell, das die CLL simuliert (EμTCL1-Mausmodell), und eine genetisch veränderte Variante dieser Maus (EμTCL1/p66Shc/- Maus), in der das Gen für p66Shc deletiert ist.
Das zweite Kapitel beschreibt die Ziele und die Vorgehensweise der Forschungsarbeit. Das dritte Kapitel erläutert die verwendeten Materialien und Methoden, einschließlich der Mausmodelle, der Zellkulturtechniken, der RNA-Isolierung, der Real-Time PCR und der statistischen Datenanalyse. In Kapitel 4 werden die Ergebnisse der Studie präsentiert und diskutiert. Die Ergebnisse zeigen, dass die Expression bestimmter Chemokine in stromalen Zellen, die mit leukämischen B-Zellen aus EμTCL1/p66Shc/- Mäusen co-kultiviert wurden, im Vergleich zu den stromalen Zellen, die mit leukämischen B-Zellen aus EμTCL1-Mäusen co-kultiviert wurden, signifikant verändert ist.
Schlüsselwörter
Die wichtigsten Schlüsselwörter dieser Arbeit sind: chronisch lymphatische Leukämie (CLL), Mikromilieu, stromale Zellen, Chemokine, p66Shc, Mausmodell, Real-Time PCR, co-Kultur, Rekrutierung von leukämischen B-Zellen.
- Quote paper
- Gianpiero Lupoli (Author), 2019, Cellule b-cll di topi Eμ-TCL1/p66Shc-/- modulano l’espressione delle chemiochine in cellule stromali, Munich, GRIN Verlag, https://www.grin.com/document/1398781
