La introducción de la tecnología del ADN recombinante ha permitido la explotación industrial de proteínas con propiedades terapéuticas que permanecían limitadas para su comercialización. Gracias a esto, las proteínas recombinantes juegan un papel muy importante en la medicina moderna. Vacunas, anticuerpos, hormonas y agentes anticancerígenos son sólo algunos ejemplos de la gran variedad de proteínas recombinantes que se pueden obtener al emplear esta tecnología.
A la par del uso de proteínas recombinantes, se ha favorecido el desarrollo de mejores métodos para su producción y purificación. Diversos microorganismos han sido desarrollados como las mejores opciones para expresar proteínas, destacando entre ellos la levadura metilotrófica Pichia pastoris, la cual cuenta con mecanismos de expresión condicionada de proteínas recombinantes y la capacidad para favorecer su secreción al medio de cultivo.
La presente investigación se enfoca en la purificación de la hormona de crecimiento bovina recombinante expresada por la levadura P. pastoris, empleando para esto técnicas cromatográficas que se basan en las características intrínsecas de la proteína de interés para lograr su acondicionamiento hacia el ambiente más adecuado para su posterior utilización en análisis especializados de bioactividad
Inhaltsverzeichnis
- CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO
- 1.1. Introducción
- 1.2. Antecedentes
- 1.2.1. Cromatografía de intercambio aniónico
- 1.2.2. Cromatografía de interacciones hidrofóbicas
- 1.2.3. Cromatografía de exclusión molecular
- 1.2.4. Cromatografía líquida de alta resolución
- 1.3. Justificación
- 1.4. Hipótesis
- CAPÍTULO II. OBJETIVOS
- 2.1. General
- 2.2. Particulares
- CAPÍTULO III. MATERIAL Y MÉTODOS
- 3.1. Esquema general del trabajo
- 3.2. Material
- 3.2.1. Equipo
- 3.2.2. Material
- 3.2.3. Reactivos
- 3.3. Métodos
- 3.3.1. Purificación de la bGH
- 3.3.2. Cromatografía de intercambio aniónico
- 3.3.3. Cromatografía de interacciones hidrofóbicas
- 3.3.4. Cromatografía de exclusión molecular
- 3.3.5. Cromatografía liquida de alta resolución
- 3.3.6. Western Blot
- 3.4. Análisis de proteínas
- 3.4.1. Electroforesis en geles de poliacrilamida
- 3.4.1.1. Preparación de soluciones stock
- 3.4.1.2. Procedimiento
- 3.4.2. Cuantificación de proteínas totales
- CAPÍTULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
- 4.1. Implementación de metodologías
- 4.2. Esquema de purificación
- CAPÍTULO V. CONCLUSIONES
Zielsetzung und Themenschwerpunkte
Die vorliegende Arbeit befasst sich mit der Entwicklung eines effektiven Reinigungsschemas für bovines Wachstumshormon (bGH), das von Pichia pastoris produziert wird. Das Hauptziel ist es, eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Isolierung und Reinigung von bGH zu etablieren, um die Qualität und Reinheit des Produkts zu gewährleisten.
- Entwicklung und Optimierung eines Reinigungsschemas für bGH
- Anwendung verschiedener chromatographischer Methoden zur Trennung und Reinigung
- Bewertung der Reinheit und Wirksamkeit des gereinigten bGH
- Analyse der Auswirkungen des Reinigungsprozesses auf die biologische Aktivität des Hormons
- Optimierung der Proteinproduktion und -reinigung für die zukünftige Anwendung in der Biotechnologie
Zusammenfassung der Kapitel
Kapitel I bietet eine umfassende Einführung in die Thematik der bGH-Reinigung und erläutert die relevanten theoretischen Grundlagen. Die Kapitel II und III beschreiben die Zielsetzung der Arbeit sowie die verwendeten Materialien und Methoden. Kapitel IV präsentiert die erzielten Ergebnisse und diskutiert deren Bedeutung im Kontext der aktuellen Forschung. Die Schlussfolgerungen und die zukünftigen Perspektiven werden in Kapitel V zusammengefasst.
Schlüsselwörter
Bovines Wachstumshormon, Pichia pastoris, Proteinreinigung, Chromatographie, Elektroforesis, Western Blot, Biologische Aktivität, Biotechnologie.
- Citar trabajo
- Juan Chiu (Autor), 2011, Desarrollo de un esquema de purificación para la hormona de crecimiento bovina producida por Pichia pastoris, Múnich, GRIN Verlag, https://www.grin.com/document/300618
