Ziel des Versuches ist es, Lysozym aus zu isolieren und zu reinigen. Dafür wurde die Methode der Kationenaustauschchromatografie aufgrund des hohen isoelektrischen Punkts von Lysozym ausgewählt. Die erhaltenen Fraktionen der Chromatografie wurden auf den Proteingehalt und die Lysozymaktivität durch eine fotometrische Messung untersucht. Der Erfolg der Reinigung und Anreicherung durch eine SDSPage kontrolliert und bestätigt.
Inhaltsverzeichnis
- Zusammenfassung
- Einleitung
- Materialien und Methoden
- Ergebnisse
Zielsetzung und Themenschwerpunkte
Dieser Versuch verfolgt das Ziel, Lysozym aus Hühner-Eiklar zu isolieren und zu reinigen. Dafür wird die Methode der Kationenaustauschchromatografie angewandt, die aufgrund des hohen isoelektrischen Punkts von Lysozym geeignet ist.
- Reinigung von Lysozym durch Kationenaustauschchromatografie
- Bestimmung des Proteingehalts mit der Bradford-Methode
- Ermittlung der Enzymaktivität durch fotometrische Messung
- Qualitative Charakterisierung der Reinigung mittels SDS-Page
- Berechnung des Anreicherungsfaktors und der Ausbeute
Zusammenfassung der Kapitel
Zusammenfassung
Dieser Versuch beschreibt die erfolgreiche Isolierung und Reinigung von Lysozym aus Hühner-Eiklar mithilfe der Kationenaustauschchromatografie. Die Reinigungseffizienz wurde durch die Bradford-Methode, eine fotometrische Aktivitätsmessung und eine SDS-Page bestätigt.
Einleitung
Der Versuch stellt das Enzym Lysozym und seine Eigenschaften vor. Die Bedeutung des Enzyms in verschiedenen Organismen und seine Rolle bei der Abwehr von bakteriellen Infektionen werden erläutert. Der isoelektrische Punkt und die Molekularmasse von Lysozym werden angegeben.
Materialien und Methoden
Die verwendeten Materialien und Methoden zur Reinigung von Lysozym werden detailliert beschrieben. Dazu gehören die Kationenaustauschchromatografie, die Bradford-Methode zur Proteinbestimmung, die fotometrische Aktivitätsmessung und die SDS-Page. Die einzelnen Schritte werden erläutert und die zugrundeliegenden Prinzipien der Methoden werden erklärt.
Ergebnisse
Die Ergebnisse der Reinigung und Analyse von Lysozym werden präsentiert. Die Ergebnisse der Proteinbestimmung, der Enzymaktivitätsmessung und der SDS-Page werden in Form von Tabellen und Abbildungen dargestellt und interpretiert. Die erzielte Anreicherung und Ausbeute werden berechnet und diskutiert.
Schlüsselwörter
Lysozym, Kationenaustauschchromatografie, Proteinreinigung, Bradford-Methode, Enzymaktivität, SDS-Page, Anreicherungsfaktor, Ausbeute, Hühner-Eiklar, isoelektrischer Punkt, Murein, Bakterielle Zellwand, Muramidasen, hydrolytische Spaltung, glykosidische Bindung, N-Acetylmuraminsäure, N-Acetylglucosamin
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- Anonym (Autor), 2016, Reinigung von Lysozym durch Ionenaustauschchromatografie, Múnich, GRIN Verlag, https://www.grin.com/document/370413
