Vertiefungskurs
Molekularbiologische Methoden

"Mikrobielle Gentechnologie"
(03.03.2008 - 07.03.2008)

Praktikumsprotokoll

Protokollant: Arlie Zegarra Pumapillo, B.Sc., 5.Semester

Inhaltsverzeichnis:

I) Versuch: Klonierung eines Hefe-Gens Einleitung 03
Materialien und Methoden 03
Ergebnisse 03
Diskussion 05
II) Versuch: Ortsspezifische Mutagenese Einleitung 08
Materialien und Methoden 08
Ergebnisse 08
Diskussion 09
Literatur 10

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I) Versuch: Klonierung eines Hefe-Gens

Einleitung

Im vorliegenden Versuch wird die Klonierung des Hefe-Gens sba1 erzielt.

Materialien und Methoden

Diese wurden wie beschrieben im Skript verwendet bzw. durchgeführt. Abweichungen vom Skript sind:

Bei der Zugabe von Lyticase wurde eine Endkonzentration von 40U/ml angesetzt statt 20U/ml [S. 6, 1.) Präparation von chromosomaler (genom.) DNA aus Hefe].

Bei der PCR mit (verdauter) genomischer Hefe DNA wurden 26 Zyklen statt 30 durchgeführt. [S.8, 3.) PCR mit (verdauter) genomischer Hefe DNA]

Bei der AGE der PCR-cDNA-Fragmente wurde der Ansatz des eigenen, gereinigten und verdauten PCR-cDNA-Fragments (Ansatz 1) auf 2 Geltaschen verteilt, jeweils auf 25µl und 20µl. [S.10, 7.)Gelreinigung der PCR-cDNA-Fragmente, Agarosegelelektrophorese]

Ergebnisse

Abbildung 1 zeigt die Kontrolle von präpariertem Hefe-gDNA und die mittels PCR hergestellten cDNA-Fragmente in Agarosegel. Template für die PCR war entweder die im Versuch präparierte, genomische Hefen-gDNA (eigene gDNA) oder eine aus einer Firma fertiggekaufte Hefen-gDNA (gestellte gDNA). [...]

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