Untersuchungen zur Organisation und Sequenz menschlicher Histongene

Thèse de Doctorat , 1989 , 182 Pages , Note: magna cum laude

Médecine - Néoplasmes, Oncologie

DNA-Sequenzierungen nach Sanger und Maxam-Gilbert -
Histone spielen eine wichtige Rolle in der Organisation der Erbsubstanz und sind an Prozessen der Genregulation beteiligt.
Ziel der Arbeit war es, Gene menschlicher Histone zu analysieren und deren Anordnung (Histongengruppen, Cluster) auf dem menschlichen Genom zu beschreiben und mit anderen Säugern zu vergleichen. Es gelang die Analyse der Organisation von 3 Clustern menschlicher Histongene und Bestimmung deren DNA Sequenzen.

Inhaltsverzeichnis

• 1. Einleitung
• 2. Material und Methoden
• 2.1. Material
• 2.1.1. Chemikalien
• 2.1.2. Reagenziensätze
• 2.1.3. Enzyme
• 2.1.4. Nucleotide
• 2.1.5. Zellen
• 2.2. Methoden
• 2.2.1. Analyse einer menschlichen Genbibliothek
• 2.2.1.1. Aufbau und Herkunft
• 2.2.1.2. Reagenzien
• 2.2.1.3. Herstellung von Agarplatten
• 2.2.1.4. Aussaat von Bakteriophagen
• 2.2.1.5. Transfer von Phagen-DNA auf Nitrocellulose
• 2.2.1.6. Hybridisierungssonden
• 2.2.1.7. Hybridisierung von membrangebundener DNA
• 2.2.1.8. Autoradiographie
• 2.2.1.9. Anlegen von Bakteriophagenstammkulturen
• 2.2.2. Präparation von Bakteriophagen-DNA
• 2.2.2.1. Reagenzien
• 2.2.2.2. Präparation aus Plattenlysaten
• 2.2.2.3. Präparation aus Flüssigkulturen
• 2.2.2.4. Präparation in kleinem Maßstab
• 2.2.2.5. Aufreinigung von Phagenlysat mit Lambdasorb-Antikörpern (Promega)
• 2.2.2.6. Aufreinigung von Phagenlysat mit DEAE-Cellulose
• 2.2.3. Verdauung von DNA mit Restriktionsenzymen
• 2.2.3.1. Reagenzien
• 2.2.3.2. Durchführung
• 2.2.4. Agarose-Gelelektrophorese von DNA
• 2.2.4.1. Reagenzien
• 2.2.4.2. Durchführung
• 2.2.5. Dot-Blot-Analyse von DNA
• 2.2.5.1. Reagenzien
• 2.2.5.2. Durchführung
• 2.2.6. Übertragung von DNA auf Membranfilter
• 2.2.6.1. Kapillarblot nach Southern
• 2.2.6.2. Diffusionsblot nach Reed und Mann
• 2.2.7. Markierung von DNA
• 2.2.7.1. Radioaktive Markierungstechniken
• 2.2.7.2. Nichtradioaktive Markierungen
• 2.2.8. Isolierung von DNA-Fragmenten aus Gelen
• 2.2.8.1. Extraktion aus Low-Melting-Point (LMP)-Agarosegel
• 2.2.8.2. Isolierung aus TypII-Agarosegel
• 2.2.9. Subklonierung von DNA-Fragmenten
• 2.2.9.1. Verwendete Vektoren
• 2.2.9.2. Dephosphorylierung von Vektoren
• 2.2.9.3. Vorbereitung der DNA-Fragmente
• 2.2.9.4. Ligation

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Die Dissertation untersucht die Organisation und Sequenz menschlicher Histongene. Ziel ist es, detaillierte Einblicke in die molekularen Mechanismen der Genstruktur und -funktion zu gewinnen.

• Analyse menschlicher Histongene
• Untersuchung der Genorganisation
• Sequenzierung von DNA-Fragmenten
• Anwendung verschiedener molekularbiologischer Methoden
• Detaillierte Beschreibung der verwendeten Methoden

Zusammenfassung der Kapitel

Kapitel 1 (Einleitung) führt in das Thema der menschlichen Histongene ein und beschreibt den aktuellen Forschungsstand. Kapitel 2 (Material und Methoden) detailliert die verwendeten Materialien, Chemikalien, Reagenzien und die angewandten Methoden, einschließlich der Analyse einer menschlichen Genbibliothek, der Präparation von Bakteriophagen-DNA, der Verdauung von DNA mit Restriktionsenzymen, der Agarose-Gelelektrophorese und der Subklonierung von DNA-Fragmenten.

Schlüsselwörter

Histongene, Genorganisation, DNA-Sequenzierung, Molekularbiologie, Genbibliothek, Restriktionsenzyme, Klonierung, Agarose-Gelelektrophorese.

• Université: University of Marburg
• Note: magna cum laude
• Auteur: Dr. Stefan Eick (Auteur)
• Année de publication: 1989
• Pages: 182
• N° de catalogue: V120678
• ISBN (ebook): 9783640291847
• Langue: allemand
• mots-clé: Untersuchungen, Organisation, Sequenz, Histongene, human, Molekularbiologie