The Enzyme-Linked Immunosorbent assay (ELISA) is a test that is conducted to identify the substance under study with the help of antibodies and changing color elements. It is the “wet-lab” oriented analytic biochemistry assay that consume enzyme immunoassay to detect the existence of a substance (antigen) in a liquid sample. It is of great help in medicine and plant pathology as a diagnostic tool and quality control check.
ELISA test involves one antibody according to the need of the test, where the antigen is immobilized on the solid plate. The method is done specifically and nonspecifically. The report involves the description and construction of two different ELISAs.
Inhaltsverzeichnis
1. Introduction
1.1 Theory behind Fibrinogen
1.2 Theory of Gliadin
2. AIM
3. Methods
4. Results
4.1 Fibrinogen Result
4.2 Gliadin Result
5. Discussion
Zielsetzung & Themen
Das Hauptziel dieser Arbeit besteht darin, eine ELISA-Standardkurve für die Proteine humanes Fibrinogen und Gliadin zu erstellen, um deren Konzentration in unbekannten Proben zu bestimmen und die Leistungsfähigkeit von Single- und Double-Antikörper-Methoden zu vergleichen.
- Durchführung von ELISA-Experimenten mit humanem Fibrinogen und Gliadin.
- Erstellung und Analyse von ELISA-Standardkurven mittels Excel.
- Bestimmung von Proteinkonzentrationen in unbekannten Proben.
- Vergleich der Effizienz von monoklonalen (Single) und polyklonalen (Double) Antikörpern.
- Diskussion über praktische Anwendungsmöglichkeiten der ELISA-Technik.
Auszug aus dem Buch
Theory behind Fibrinogen
It is possible to differentiate between the intact and processed Fibrinogen using Sandwich ELISA. In theory, the sandwich ELISA is an efficient method to detect sample antigen. The method involves the two layers of antibodies i.e. detection and capture antibodies. An antigen under study must have at least two antigenic epitope that are capable to bind an antibody (monoclonal and polyclonal) and hence easily detectable in the system (ELISA encyclopedia ).
The biochemistry of fibrinogen can be manipulated when designing an appropriate ELISA sandwich assay. On the other hand, intact fibrinogen is only present in plasma. Fibrinogen is a protein produced by the liver that helps to stop bleeding by forming blood clots. During normal clotting, Fibrinogen is broken by thrombin that is also an enzyme, into short sections of fibrin. It can be measured in serum or plasma (Brunner, E.; Smith, G.; Marmot, M.; Canner, R.; Beksinska, M.; O’Brien, J.).
Sandwich ELISA is used to distinguish both Fibrinogen because it utilizes two antibodies to detect. The first antibody is the capture, and other is detection. These two antibodies detect the distal portion of intact fibrinogen that in turns useful to distinguish plasma and serum.
Zusammenfassung der Kapitel
Introduction: Dieses Kapitel erläutert die Grundlagen des ELISA-Verfahrens sowie die theoretischen Hintergründe zu den untersuchten Proteinen Fibrinogen und Gliadin.
AIM: Hier werden die experimentellen Ziele definiert, insbesondere die Erstellung der Standardkurven und der Methodenvergleich.
Methods: Dieses Kapitel beschreibt den detaillierten Versuchsaufbau, die Probenvorbereitung und die Durchführung der Verdünnungsreihen.
Results: Hier werden die gesammelten Daten, die berechneten OD-Werte und die daraus resultierenden Standardkurven für Fibrinogen und Gliadin präsentiert.
Discussion: Dieses Kapitel wertet die Ergebnisse aus und vergleicht die Eignung von monoklonalen und polyklonalen Antikörpern sowie die breiten Anwendungsmöglichkeiten der ELISA-Methode.
Schlüsselwörter
ELISA, Fibrinogen, Gliadin, Antikörper, Sandwich-Verfahren, Standardkurve, Proteinkonzentration, monoklonal, polyklonal, optische Dichte, Diagnostik, biochemische Analyse, Antigen, Labormethodik, Serum.
Häufig gestellte Fragen
Worum geht es in dieser Arbeit grundsätzlich?
Die Arbeit befasst sich mit der praktischen Anwendung des ELISA-Tests zur Quantifizierung der Proteine Fibrinogen und Gliadin sowie der methodischen Auswertung der Ergebnisse.
Was sind die zentralen Themenfelder der Untersuchung?
Die zentralen Themen sind die biochemische Proteindetektion, der Vergleich verschiedener Antikörper-Bindungsstrategien und die Erstellung wissenschaftlicher Standardkurven.
Was ist das primäre Ziel oder die Forschungsfrage?
Das Hauptziel ist die Etablierung einer verlässlichen ELISA-Standardkurve, um Konzentrationen in unbekannten Proben zu bestimmen und die Effektivität verschiedener Antikörper-Methoden gegenüberzustellen.
Welche wissenschaftliche Methode wird verwendet?
Es wird das enzymgebundene Immunosorbens-Assay (ELISA)-Verfahren angewendet, wobei sowohl Single- (monoklonale) als auch Double-Antikörper-Methoden (polyklonale) zum Einsatz kommen.
Was wird im Hauptteil behandelt?
Im Hauptteil werden der Versuchsaufbau, die systematische Datenaufnahme der optischen Dichte und die anschließende mathematische Auswertung der Standardkurven detailliert beschrieben.
Welche Schlüsselwörter charakterisieren die Arbeit?
Die Arbeit wird primär durch Begriffe wie ELISA, Fibrinogen, Gliadin, Antikörper, Standardkurve und biochemische Detektion charakterisiert.
Warum wird im Fazit die Verwendung von polyklonalen Antikörpern bevorzugt?
Der Autor argumentiert, dass polyklonale Antikörper kostengünstiger sind, ein stärkeres Signal bei niedrigen Proteinkonzentrationen liefern und somit zu genaueren Ergebnissen führen.
Welche Bedeutung hat der R²-Wert in der Datenanalyse?
Der R²-Wert dient als statistisches Maß für die Genauigkeit der Datenanpassung an die Regressionsgerade; ein Wert nahe 1 signalisiert dabei eine nahezu perfekte Übereinstimmung der Messwerte mit dem Modell.
Inwiefern spielt der Faktor Zeit eine Rolle bei der Wahl der Antikörper?
Der Autor stellt fest, dass polyklonale Antikörper weniger zeitintensiv in der Anwendung sind als monoklonale, da letztere zusätzliche Zeit für Hybridisierungsprozesse benötigen.
- Citar trabajo
- Yumna Mubashir (Autor), 2015, ELISA (Enzyme-Linked Immunsorbent Assay) Practical Report, Múnich, GRIN Verlag, https://www.grin.com/document/299024
